Z6·尊龙凯时提供的HL-7702人肝正常细胞[L-02]培养说明书包含以下内容：

一、细胞培养条件

细胞名称：HL-7702人肝正常细胞[L-02]

生长特性：贴壁生长

冻存条件：推荐使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：首次传代建议1:2比例进行；每两天更换培养液。

备注：采用无菌离心管收集培养基以便进行对比培养，如果对比实验效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞接收及处理

收到细胞后，待其生长至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，以确保细胞的健康运输。首次处理细胞时，请用75%酒精消毒整个细胞瓶，并在超净台下继续进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，然后再进行后续操作。建议在不同倍数下拍照记录细胞生长状态，前三天的照片为售后服务的重要依据，未提供照片将默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞未达到80%汇合度时，将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基继续培养。如果细胞密度超过80%，则可以进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS对细胞进行洗涤1-2次。
2. 向培养瓶中添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分已变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶并加入5ml培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 向培养瓶中添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，置于显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打促使细胞脱落，再转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，如需转入液氮罐，应在-80℃冰箱中保存24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，至无冰晶后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，细胞可能脱落，属于正常现象。如脱落量较大，应收集所有培养液于离心管中，离心后收集上清作过渡培养，再用胰酶处理沉淀细胞。最快的解冻和培养操作有助于保持细胞活性。

五、售后条款

针对细胞运输、培养出现的问题与售后规定，Z6·尊龙凯时提供详细的重发标准和不予重发的情形，确保客户权益。请根据收到细胞后的观察记录及时反馈，以便及时处理相关事宜。

如有问题或需进一步指导，欢迎随时与我们联系。