### 哺乳动物蛋白提取试剂盒介绍

本款Z6·尊龙凯时哺乳动物蛋白提取试剂盒包含以下成分：

• 5XBuffer: 10ml
• 5XNaCl: 10ml
• 5XSDS: 10ml
• 5XDOC: 10ml
• 5XNP-40: 10ml
• 20XPBS: 10ml
• Protease inhibitor cocktail: 0.5ml

#### 保存条件

试剂盒可在常温下保存，唯独Protease inhibitor cocktail需置于-20°C保存，保质期为24个月。

#### 提取步骤

**1. 准备细胞裂解缓冲液：** 根据5XBuffer、5XNaCl、5XSDS、5XDOC和5XNP-40按1:1:1:1:1（v/v）配比制备细胞裂解缓冲液，每1ml的裂解缓冲液适用于提取106至107个细胞或5至20mg的组织。使用前加入10μl的Protease inhibitor cocktail。

**2. 清洗细胞或组织：**

a. 对于贴壁细胞：去除细胞中的培养基，用PBS缓冲液洗涤细胞两次，加入细胞裂解缓冲液（106~107个cells/ml），在冰袋中孵育30分钟并定期重悬细胞，最后刮取并收集裂解液。

b. 对于悬浮细胞：将细胞在700xg下离心5分钟，弃去上清液，用PBS重悬洗涤细胞两次，然后在4°C下离心并去除上清液。最终将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中，在冰袋中孵育30分钟。

c. 对于组织样品：切割组织成小块后用PBS冲洗两次，加入细胞裂解缓冲液（5~20mg组织/ml），转移至预冷的微量匀浆器中，在冰上均匀化30~50次。注意，均质过程对靶蛋白的功能完整性至关重要。

**3. 离心和收集蛋白质：** 在4°C下，以12,000xg离心裂解的细胞10分钟，以沉淀细胞碎片，或者进行高速离心，在100,000xg下离心45分钟以制备蛋白质溶液。

**4. 保存上清液：** 将含有蛋白质的上清液转移至冷冻管中，可以在冰上立即使用，或者将蛋白质溶液存放在-70°C保存以备后续使用。

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