大肠杆菌是生物医学领域广泛使用的工程菌之一，因其生长迅速、培养成本低以及基因克隆表达系统成熟等特点，成为基因工程的优选载体。它的质粒在基因的分子克隆、疫苗研发以及重组蛋白类药物的生产中发挥了重要作用。然而，必须严格控制相关生物制品中的内毒素残留水平，以保障产品安全性。

内毒素的概述

内毒素存在于革兰氏阴性菌的细胞壁最外层，构成了细胞壁的黏肽部分。其主要成分是磷脂-多糖-蛋白质复合物，毒性核心是脂多糖（LPS）中的类脂A。内毒素通常在细菌死亡或被人为破坏时释放到环境中。当它进入人体后，通过与宿主细胞上的Toll样受体（TLR）结合，激活体内的炎症细胞和因子，引发发热及全身炎症反应，严重时可能导致弥散性血管内凝血、休克和多脏器功能衰竭，统称为“热原”。内毒素的生物活性非常强，微量即可诱发多种炎症反应和免疫应答，并且对热和化学药品具有较强的耐受性，只有强酸、强碱或强氧化剂能够有效破坏其结构。

内毒素的检测方法

内毒素的检测方法基于其与特定检测试剂的反应。常见的检测技术包括凝胶法、重组C因子法和动态比浊法。例如，鲎试剂中的C因子能与内毒素结合并引发动脉血凝级联反应，凝胶法通过观察有无凝集素形成来判断内毒素的存在。这种方法简便易操作，但检测范围可能有限。随着对鲎资源的保护和重组技术的发展，人工合成的重组C因子逐渐应用于检测中。该重组C因子激活后能与荧光底物反应产生荧光信号，信号强度与内毒素浓度成正比，便于评估内毒素含量。此外，动态比浊法通过光学测定仪对反应混合物的OD值和浊度变化进行监测，不仅有助于追踪产品质量，还有助于风险预警。

内毒素的去除方法

由于内毒素的危害性，FDA等法规对其控制有明确要求。首先，需要在源头消除外源性内毒素污染，在生物药物的研发和生产过程中，确保与样品直接接触的设备、容器、储液袋及原辅料经过严格消毒。对于样品内在的内源性内毒素污染，则需从样品制备工艺入手，采用合适的方法，如离子交换层析法、疏水层析法和特异性吸附法等。

Z6·尊龙凯时推荐的离子交换层析法可以依据目标产物与内毒素在缓冲液中带电性质的差异，利用这种方法去除内毒素；而疏水层析法则基于内毒素在高盐条件下不易结合于疏水填料的特性，实现其去除。此外，特异性吸附法将多粘菌素B偶联于层析介质，通过介质特异性吸附内毒素，确保蛋白质不被吸附而随流出，尽管此法可能导致一定的蛋白损失。通过结合凝胶过滤层析和切向流膜过滤技术，内毒素的去除效果也得以进一步增强。这些方法均在生物药物的净化过程中发挥着重要作用。