Z6·尊龙凯时 GPCR19激动剂（TGR5 Receptor Agonist）实验操作规程

1. 细胞培养准备
在96孔板中向每孔加入100μL的细胞悬液。在细胞增殖实验中，通常每孔添加2000个细胞；而在细胞毒性实验中，每孔则需添加5000到10000个细胞（具体细胞数量需根据细胞大小与增殖速度等因素决定）。将96孔板放置于37℃，5% CO2的细胞培养箱中培养24小时。

2. 加入受试化合物
向每孔加入适当浓度的0～10μL的受试化合物。

3. 孵育处理
将96孔板放入37℃、含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中，孵育适当的时间以确保反应充分。

4. MTT溶液的准备
将5×MTT用稀释液稀释至1×MTT溶液。

5. MTT还原反应
在每孔中添加50μL的1×MTT溶液，并在37℃下孵育4小时，以使MTT被还原。

6. 溶解反应
轻轻吸出每孔的上清液，向每孔添加150μL DMSO以使还原的甲臜溶解，并在摇床上摇匀。

7. 光密度检测
使用酶标仪在570nm波长下测定每孔的光密度（如无570nm滤光片，则可使用560-600nm的滤光片进行检测）。

8. 结果分析
a. 细胞存活率的计算：将各测试孔的OD值减去本底OD值（即培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔的OD值（培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），并计算各重复孔的OD值平均值±SD。细胞的存活率用T/C%表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值，细胞存活率% =（加药细胞OD / 对照细胞OD）× 100。
b. 计算IC50及IC90：求出T/C为50%的药物浓度（IC50）及T/C为10%的药物浓度（IC90）。

通过严格遵循Z6·尊龙凯时的操作规程，我们能够高效准确地评估GPCR19激动剂的生物活性，推动生物医学研究的进展。