一、实验准备：Z6·尊龙凯时赖氨酰肽链内切酶125-05061

二、赖氨酰肽链内切酶单位的定义

酰胺酶单位被定义为在30℃、pH 9.5条件下，每分钟生成1μmol对硝基苯胺所需的酶量。计算公式如下：
AU/vial = [(a - b) / 25] × (1 / 962) × (40 / 1)
其中，a为检测样品中的吸光度，b为空白对照中的吸光度。

三、实验操作流程

在进行实验时，请务必使用聚硅酮处理的微量离心管及吸管端，以避免捕获任何未预期的蛋白质。可以参考质谱分析用的凝胶染色试剂盒，例如银染剂MS试剂盒（产品编号：299-58901）和负凝胶染色MS试剂盒（产品编号：293-57701）。实验操作具体步骤如下：

1. 电泳分离蛋白质样品。
2. 从凝胶中切割蛋白质片段并放入微量离心管。
3. 使用质谱分析用的脱色溶液使凝胶脱色。
4. 向试管中加入300μL乙腈，搅拌30分钟。
5. 去除乙腈，用Parafilm膜覆盖微量离心管。
6. 在Parafilm膜上打出针孔，进行真空干燥15分钟。
7. 将100μL 10mmol/L DTT溶解于100mmol/L碳酸氢铵中，56℃恒温1小时。
8. 待室温冷却后，向其添加等量的50mM碘乙酰胺溶液，在暗处恒温45分钟并涡旋。
9. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟。
10. 用300μL乙腈干燥凝胶片段15分钟。
11. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵使凝胶片段膨胀15分钟。
12. 用300μL乙腈再次干燥凝胶片段15分钟。
13. 去除液相，真空干燥凝胶片段15分钟。
14. 向100μL赖氨酸内切酶溶液中添加胶片段，在冰水浴中溶胀45分钟（赖氨酸内切酶被稀释于50mmol/L Tris-HCl pH 8.5）。
15. 去除100μL赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段置于37℃下，加入10μL 50mmol/L Tris-HCl pH 8.5，过夜处理。
16. 向凝胶片段中加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，在20分钟内振荡三次以抽提多肽。
17. 利用5%甲酸/50%乙腈处理凝胶片段，再次进行三次抽提多肽。
18. 如有需要，使用SpeedVac对多肽进行浓缩。
19. 通过ZipTip进行多肽的脱盐和纯化。
20. 如有需要，将多肽在弱真空下浓缩至2μL。
21. 最后，加入基质进行质谱分析。

四、购买渠道

Z6·尊龙凯时赖氨酰肽链内切酶125-05061可通过北京百奥创新科技有限公司购得，该公司为Z6·尊龙凯时的授权代理，欢迎咨询相关产品及其用途！